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企業(yè)展示阿茲夫定聯(lián)用多替拉韋鈉在中國健康受試者中的藥代動力學(xué)研究
Pharmacokinetic study of azvudine in combination with dolutegravir in Chinese healthy subjects
作者：汪 云1，吳金伶2，馬莎莎2，李 敬1，何斌源2，萬元浩2，李雪珂3，龍正威3，崔 桅1
( 1. 天津市人民醫(yī)院Ⅰ期臨床試驗(yàn)研究室，天津 300121; 2. 河南真實(shí)生物科技有限公司，河南 平頂山 467036; 3. 上海浦濟(jì)醫(yī)藥科技有限公司，上海 200131)
來源：中國臨床藥理學(xué)雜志. 第39卷 第13期 2023年7月(總第387期)
摘要 目的 評價健康受試者同時多次口服阿茲夫定(FNC) 和多替拉韋鈉 (DTG) 后，DTG對FNC及FNC對DTG藥代動力學(xué)的影響。方法 本研究采用單中心、隨機(jī)、開放、三周期、三交叉設(shè)計。入組15例受試者，隨機(jī)分為3組，每組5例，每組受試者隨機(jī)交叉多次服用FNC/DTG/FNC+DTG。采用液相色－串聯(lián)質(zhì)譜法( LC－MS /MS) 測定血漿中FNC和DTG的濃度。計算主要藥代動力學(xué)參數(shù)并進(jìn)行統(tǒng)計分析。結(jié)果 單用DTG和FNC+DTG聯(lián)用時血漿中DTG的藥代動力學(xué)參數(shù):Cmax,ss分別為(4621.33±1248.27)和(4728.67±980.58)ng·mL－1，AUC0－t,ss分別為(97530.27±33757.28) 和(101136.63±31214. 96)ng·h·mL－1AUC0－∞,ss分別為(97477.76±31426.55)和(105485.81± 32827.57)ng·h·mL－1; 單用FNC和FNC+DTG聯(lián)用時血漿中FNC的藥代動力學(xué)參數(shù):Cmax,ss分 別 為 (2.19 ±0.95)和(3.04±1.37)ng·mL－1，AUC0－t,ss分別為(2.72±0.85)和(3.25±1.03)ng·h·mL－1，AUC0－t,ss分別為(3.28±0.76)和(3.37±0.85)ng·h·mL－1。單用DTG和DTG+FNC聯(lián)用時血漿中DTG的Cmax,ss、AUC0－t,ss和AUC0－∞,ss幾何均數(shù)比值分別為103.68%、105.06%和104.38%;單用FNC與DTG+FNC聯(lián)用時血漿中FNC的Cmax,ss和AUC0－t,ss幾何均數(shù)比值分別為137.04% 和120.31%。結(jié)論 FNC對DTG的藥代動力學(xué)無顯著影響，DTG對FNC的藥代動力學(xué)可能有顯著影響。 阿茲夫定( azvudine，F(xiàn)NC) 能抑制人類免疫缺陷病毒( human immunodeficiency virus，HIV) 反轉(zhuǎn)錄酶與輔助蛋白病毒感染因子( viral infectivity factor，Vif)雙靶點(diǎn)，選擇性進(jìn)入HIV靶細(xì)胞－外周血單核細(xì)胞( peripheral blood monouclear cells，PBMCs) 中的 CD4、CD14 細(xì)胞抑制病毒復(fù)制［1］。多替拉韋鈉( dolutegra-vir，DTG) 是第二代整合酶抑制藥，世界衛(wèi)生組織及中國抗病毒指南推薦現(xiàn)為首選一線治療 HIV 抗病毒藥物［2］。本 試 驗(yàn) 根 據(jù) FNC 藥品注冊審批意見( 2021S00826) 開展藥物相互作用( drug－ drug intera-ction，DDI) 臨床研究，在健康受試者中評價 DTG 和FNC 藥代動力學(xué)的相互影響，為臨床合理用藥提供參考。 材料、對象與方法
本研究采用單中心、隨機(jī)、開放、三周期、三交叉試驗(yàn)設(shè)計。試驗(yàn)共入組15 例受試者，隨機(jī)分為3組，每組5例，早上空腹交叉口服 FNC 3 mg 或 DTG 50 mg或聯(lián)用 FNC 3 mg + DTG 50 mg，每周期連續(xù)口服5 d，3組的 給藥順序分別為FNC+DTG/FNC/DTG、FNC/DTG/FNC+DTG和DTG/FNC+DTG/FNC。周期間的洗脫期為7d。
每天受試者以溫水 240 mL 送服藥物，服藥前后1h禁水，服藥后約 1、4 和10 h進(jìn)食標(biāo)準(zhǔn)供應(yīng)的早餐、午餐和晚餐。每周期的第 3 天和第4天于給藥前(0h) 、第5天(D5) 于給藥前(0h) 和給藥后 0. 25、0. 5、0. 75、1、1. 5、2、3、4、6、8、12、24、48 h 采集上肢靜脈血約 3 mL。在 4 ℃ 條件下以 1700 × g 離心10 min，抽取上層血漿分裝至檢測管及備份管中。血樣采集后 2h 內(nèi)，將血漿樣本轉(zhuǎn)移置于－60 ℃冰箱保存，待測。
FNC色譜條件 色譜柱: DIKMA Diamonsil C18柱( 5 μm，100. 0mm×4. 6mm) ; 柱溫: 40℃ ; 流動相:A 為含1mmol·L－1乙酸銨和 0.1% 甲酸的水溶液，B為 0. 1% 甲酸的乙腈-甲醇=4∶1( v/v) 溶液; 進(jìn)樣量:5.00 μL; 流 速: 0.50 mL·min－1。梯度洗脫條件:0. 00～0. 50 min10% B; 1.70min 20% B; 2. 40 min40% B; 4. 50 ～5. 50 min 95%B; 5. 51 ～6. 50 min 10%B。
DTG 色譜條件 色譜柱: Agilent ZOＲBAXEclipse XDB － C18 柱( 5 μm，100. 0 mm × 4. 6 mm) ; 柱溫: 40 ℃ ; 流 動 相: A 為 含 1 mmoL · L－1 乙 酸 銨 和0. 1% 甲酸的水溶液，B 為含 0. 1% 甲酸的乙腈溶液;進(jìn)樣量: 2. 00 μL; 流速: 0. 60 mL·min－1。梯度洗脫條件: 0 ～ 0. 50 min 60% B; 1. 80 ～ 2. 80 min 95% B;2. 81 ～ 3. 50 min 60% B。
質(zhì)譜條件 電噴霧離子源，正離子模式，多反應(yīng)監(jiān)測方式掃描，F(xiàn)NC 碰撞能量為 25 V，拉米夫定碰撞能量為 15 V，DTG 和 DTG － d5 碰撞能量均為 39 V。FNC 離子對為 m /z 287. 20→112. 20，拉米夫定離子對為 m /z 230. 10→112. 10，DTG 離子對為 m /z 420. 30→277. 10，DTG － d5離子對為 m /z 425. 30→277. 10。
血漿樣品處理 樣品在室溫白光下融化后，渦旋混勻; 移取 50 μL 于 96 孔板中，加入內(nèi)標(biāo)溶液20μL和 0. 5% 甲酸的乙腈溶液430μL，充分震蕩約10 min，在 4 ℃條件下以 2 000 × g 離心 10 min。移取上清液250 μL 于新的 96 孔板中，氮?dú)?40 ℃ 吹干，加入乙腈－水 =1∶4( v/v) 溶液 250 μL，渦旋 10 min，在 4 ℃ 條件下以 2 000 × g 離心5 min，得進(jìn)樣板 1，用于 FNC 進(jìn)行液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜法( liquid chromatography tandem mass spectrometry，LC－MS /MS) 分析。取進(jìn)樣板1 的溶液 30. 0μL于新的 96 孔板中，加入乙腈－水 =1∶4( v/v) 溶液570μL，充分震蕩約10 min，在 4 ℃條件下以 2000× g 離心5min，得進(jìn)樣板2，用于DTG進(jìn)行LC－MS /MS 分析。
專屬性 在樣品測定條件下，空白血漿樣本處理后，F(xiàn)NC 和內(nèi)標(biāo) 3TC 的保留時間為 2. 64min 和 2.36min，DTG 和內(nèi)標(biāo)DTG－d5的保留時間均為 1.17min，樣品峰處均無干擾，血漿中內(nèi)源性物質(zhì)不干擾測定。色譜圖見圖 1。
標(biāo)準(zhǔn)曲線與定量下限 以待測物FNC(DTG) 與內(nèi)標(biāo)拉米夫定(DTG－d5) 峰面積的比值為縱坐標(biāo)(y) ，以血漿中待測物濃度為橫坐標(biāo)(x)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，用加權(quán)(1/x2) 最小二乘法進(jìn)行線性回歸。FNC血漿標(biāo)準(zhǔn)曲線的質(zhì)量濃度均為 0. 20、0. 40、1. 00、5. 00、20. 0、40. 0、80. 0 和 100ng·mL－1，回歸方程為 y =1. 48×10－2x－0. 20×10－4(Ｒ2 = 0. 9979) ，F(xiàn)NC 的線性范圍 為 0. 20～100 ng · mL－1，定 量 下 限 為 0. 20ng·mL－1。DTG 血漿標(biāo)準(zhǔn)曲線 的質(zhì)量濃度均為10. 0、20. 0、50. 0、250、1000、2000、4 000 和 5 000ng·mL－1，回歸方程為 y = 2.08 × 10－3x + 3.13 × 10－4(Ｒ2= 0. 9980 ) ，DTG 的線性范圍為10. 0～5 000ng·mL－1，定量下限為10. 0ng·mL－1。
精密度與回收率 配制定量下限、低、中－1、中－2、高5個質(zhì)量濃度水平的質(zhì)控樣品(FNC: 0. 20、0. 60、4. 00、50. 0、75. 0ng·mL－1; DTG: 10. 0、30. 0、200、2500、3750ng·mL－1) ，每個質(zhì)量濃度水平取 6 個樣本分析，連續(xù)測定3 個批次，計算批內(nèi)、批間精密度。同時比較低、中、高3個質(zhì)量濃度水平經(jīng)提取與未經(jīng)提取的待測物 FNC 及 DTG 的峰面積比值，計算回收率。批內(nèi)批間精密度良好，精密度與回收率結(jié)果見表1。
基質(zhì)效應(yīng) 在低、中－2、高3個質(zhì)控濃度水平配制一組含基質(zhì)樣品，即向基質(zhì)( 6 批不同來源) 的空白提取物中分別加入待測物和內(nèi)標(biāo)的溶液，另一組樣品是對應(yīng)相同濃度水平的待測物和內(nèi)標(biāo)的不含基質(zhì)的溶液樣品(n = 6) 。計算含基質(zhì)樣品及不含基質(zhì)溶液樣品中待測物峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積的比值，得到 FNC低、中－2、高濃度水平下內(nèi)標(biāo)歸一化基質(zhì)效應(yīng)因子分別為 0. 97 ± 0. 07、0. 94 ± 0. 07、0. 93 ± 0. 05，變異系數(shù)分別為 7. 55% 、7. 12% 、5. 73% 均低于 15. 0% ，無基質(zhì)效應(yīng); 得到 DTG 低、中 － 2、高濃度水平下內(nèi)標(biāo)歸一化基質(zhì)效應(yīng)因子分別為 0. 96 ± 0. 04、1. 01 ± 0. 02、1. 00± 0. 01，變異系數(shù)分別為 3. 81% 、1. 31% 、0. 78% 均低于 15. 0% ，無基質(zhì)效應(yīng)。
穩(wěn)定性 待測物在室溫白光條件下放置 52 h、待測物凍融 5 次(－60 ～－90 ℃ /室溫、白光) 、待測物凍融 5 次(－10 ～－30 ℃ /室溫、白光) 、待測物在－10 ～－30 ℃儲存 137 d 和－60～－90 ℃ 儲存 137 d、制備后樣品在自動進(jìn)樣器(6℃) 放置 779 h( FNC) 、774 h(DTG) 以及自動進(jìn)樣器樣品在自動進(jìn)樣器(6℃)放置779 h(FNC) 、758 h(DTG) 的進(jìn)樣重現(xiàn)性，以上條件下均穩(wěn)定。
采用 Phoenix WinNonlin( 8. 3 或以上版本) 非房室模型計算 FNC 和 DTG 的藥代動力學(xué)參數(shù)。對藥代動力學(xué)參數(shù)Cmax,ss、AUC0－t,ss和AUC0－∞,ss 進(jìn)行對數(shù)轉(zhuǎn)換后進(jìn)行方差分析，同時計算其幾何均值比(聯(lián)用/單用) 的 90% 置信區(qū)間; Tmax,ss采用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)檢驗(yàn)，評價 FNC 和 DTG 是否存在具有臨床顯著性的藥物相互作用。
結(jié)果
受試者連續(xù)口服 5 d FNC 單藥和 FNC + DTG 聯(lián)用后血漿中 FNC 和 DTG 的平均血藥濃度－時間曲線，見圖2。
受試者連續(xù) 5 d 口服 FNC 或 DTG 或 FNC + DTG后，血漿中 FNC 和 DTG 的主要藥代動力學(xué)參數(shù)，見表2。
討論
單用 DTG 與 DTG+FNC 聯(lián)用后血漿中 DTG 的Cmax,ss、AUC0－t,ss和AUC0－∞,ss 幾 何 均 數(shù) 比 值 及 其90% 置信區(qū)間分別為 103. 68% ( 94. 86% ～113. 31% ) 、105. 06% ( 95. 44% ～115. 65% ) 、104. 38% ( 88. 29% ～ 123. 40% ) ，均 落 在 80% ～125% ;Tmax,ss經(jīng)非參數(shù)法檢驗(yàn)無顯著性差異( P ＞ 0. 05) 。單用 FNC 與 DTG + FNC 聯(lián)用后血漿中FNC 的Cmax,ss和AUC0－t,ss幾何均數(shù)比值及其90%置信區(qū)間分別為137. 04% (103. 63% ～ 181. 23% ) 、120. 31% ( 98. 08% ～ 147. 59% ) ，未完全落在 80. 00%～ 125. 00% 范圍之內(nèi); Tmax,ss經(jīng)非參數(shù)法檢驗(yàn)無顯著性差異(P＞ 0. 05) 。說明 FNC + DTG 聯(lián)用未改變DTG的藥代動力學(xué)特征，但會顯著增加 FNC 在體內(nèi)的暴露量。
15例受試者均按方案要求完成試驗(yàn)，進(jìn)入安全性分析集。單用 FNC 時受試者共發(fā)生8例(10例次) 不良事件; 單用DTG 時受試者共發(fā)生11例(18例次) 不良事件; 聯(lián)用FNC+DTG 時受試者共發(fā)生7例(8例次)不良事件。所有不良事件均為1級，均未進(jìn)行處置和治療，本研究未發(fā)生嚴(yán)重不良事件及可疑且非預(yù)期嚴(yán)重不良反應(yīng)。
本研究遵照《藥物相互作用研究技術(shù)指導(dǎo)原則(試行)》［3］進(jìn)行隨機(jī)交叉前瞻性臨床試驗(yàn)，評估健康人體內(nèi) FNC 對 DTG 以及 DTG 對 FNC 的藥代動力學(xué)影響。本試驗(yàn)結(jié)果顯示: FNC 和 DTG 聯(lián)合用藥時血漿中 DTG 的暴露量無顯著變化，而血漿中 FNC 的Cmax,ss和AUC0－t,ss分別升高了 37. 04% 和 20. 31% ，提示 DTG 可能會促進(jìn) FNC 體內(nèi)的吸收過程。FNC主要經(jīng)細(xì)胞色素P450 (CYP) 3A、2D6 /2D1、2C9 /2C6 及2C19 /2C11 代謝，以原型及代謝物形式通過腎排泄;而 DTG 主要經(jīng)尿苷二磷酸 － 葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶 1A1代謝，僅約 10% 經(jīng) CYP 代謝［4］，這或許是兩藥聯(lián)用應(yīng)用時 FNC 和 DTG 體內(nèi)藥代動力學(xué)過程有差異的原因。
